牙齦成纖維細胞作為種子細胞在組織工程研究中的應用進展

組織工程研究包括三個重要因素：種子細胞的來源；支架材料的選擇；細胞因子的應用口腔醫學技術。其中種子細胞的來源是組織工程研究三因素中最為重要和關鍵的因素，種子細胞可根據不同的誘導環境和誘導條件分化形成各種組織工程化組織器官構建所需要的細胞口腔修復工藝。種子細胞的來源十分豐富，其中應用最多的為干細胞，它是一類具有自我復制能力和多向分化潛能的細胞，同時也是一種尚不成熟，未充分化的細胞，具有可構建并再生形成各種組織器官的功能綜合治療椅，牙片機，潔牙機。

在特定的條件下，干細胞可以分化形成多種功能的細胞執業助理醫師，待遇優厚，底薪加提成。按照干細胞發育潛能的不同可將其分為單能干細胞、多能干細胞和全能干細胞按照科學發展理念與時俱進，適應時代需要，。而按照干細胞發育階段的不同則可將其分為胚胎干細胞（embryonic stem cell，ES）和成體干細胞建立信用評價和服務能力評審制度，有 利于加強對社會辦醫的管理，引導規范行醫，提高管理水平。在眾多分類中用于構建組織工程化組織器官的種子細胞尤其以成體干細胞的應用最為廣泛，這些成體干細胞包括骨髓間充質干細胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC）、脂肪間充質干細胞、人羊膜來源的間充質干細胞（humanamniotic mesenchymal stem cell，hAMSC）以及臍帶來源間充質干細胞等價格的制定首先要符合門診的定位和定位群體的口腔健康消費心理。然而，這些間充質干細胞盡管來源廣泛，但其在來源組織中的可獲取數量十分有限，獲取高純度的間充質干細胞也就十分困難，另外，即使獲取了一定數量的間充質干細胞，其鑒定也是學者們所面臨的難點先進的消毒設施和嚴格的無菌操作，提供了優質醫療、優質服務的保證。

近年來，研究者們發現，牙齦成纖維細胞（gingival fibroblasts，GFs）具備類似干細胞的特性，具有多項分化的潛能，成為組織工程化組織器官構建所需要的新型種子細胞來源七一：一醫、一助、一機、一針、一管、一消毒、一無菌包.。現就GFs作為種子細胞在組織工程研究中的應用情況作一綜述秉承“多聽患者講一點，多為患者想一點”的服務理念。

1.種子細胞應具備的特點

應用組織工程的方法再造組織和器官所用的各類細胞統稱為種子細胞執行力是口腔診所核心競爭力形成的關鍵。因此，組織工程研究中最重要的一點就是要獲取足夠數量的接種細胞，與此同時，這些接種細胞也必須滿足能夠持續增殖、合成基質的功能和防止細胞衰老等特點管理是就要淘汰人渣、激活人員、培養人手、重用人才、與人物綁定。首先，種子細胞的獲取應滿足采用非侵襲手段和微創手段來獲得，通過大面積的創傷性手術來獲得的種子細胞盡管數量豐富，但其獲取過程對機體也存在一定的損傷；其次，種子細胞的性能應滿足分裂增生能力強和功能旺盛等特點，這就要求種子細胞能夠不斷擴增，以求達到組織工程化組織器官構建所需要的細胞數量；再次，種子細胞的相容性要求細胞種植于支架材料后或接種于體內后沒有或僅有極微弱的免疫排斥反應；最后，種子細胞的延續性應滿足能夠連續傳代，并且經過傳代培養后不會發生形態學、功能學及遺傳性質的改變口腔招聘網免費發布口腔招聘信息，。

2.種子細胞的分類來源及應用限制

組織工程研究中種子細胞的來源十分豐富，其中干細胞的研究是目前的焦點和熱點，在干細胞的研究中尤其以ES和成體干細胞的研究最為廣泛牙科醫生免費找工作，。其中，ES的研究應用一直頗具爭議，ES雖然能分化形成各種細胞類型，但不能控制其在特定部位分化形成相應的細胞，不但存在安全性和倫理學問題，而且其在植入體內后亦有致畸作用，容易形成畸胎瘤，這使ES的應用受到限制，目前研究者們正在致力于嘗試其他途徑代替ES，如可通過細胞重編程技術使患者的體細胞轉化為干細胞后再進行組織工程后續應用口腔修復醫生，口腔種植醫生，。而成體干細胞的分類則更為廣泛，也是目前為止組織工程化組織器官構建所需種子細胞的主要獲取途徑，其可來源于多種組織，如來源于骨髓組織的BMSC、來源于脂肪組織的脂肪間充質干細胞、來源于羊膜組織的hAMSC、來源于臍帶組織的臍帶間充質干細胞，以及來源于泌尿系統組織的間充質干細胞等口腔種植，口腔正畸醫生。

如果應用ES對患者進行治療，必須先將細胞進行誘導分化，來防止畸胎瘤等發生，同時必須確認ES的提供者沒有遺傳性疾病熟悉掌握方絲工矯正技術，。然而如果應用成體干細胞對患者進行治療就不存在致畸問題，即不會形成畸胎瘤熟練掌握口腔內科治療，。盡管成體干細胞具有比ES更多的優勢，但由于成體干細胞缺乏特異性的表面標志物，因此到目前為止，學術界仍然未找到鑒定成體干細胞的金標準，對于其鑒定往往是在活體組織中標記細胞，然后再通過鑒定它們所產生的特定細胞類型反過來對標記細胞進行鑒定，從而推測標記的細胞為成體干細胞中華人民共和國執業醫師法。還可以將細胞從活體組織上分離出來，標記并進行細胞培養，將擴增后的細胞移植入另一動物體內，通過觀察該細胞是否可以再生其來源組織來間接鑒定成體干細胞口腔臨床執業醫師。另外，還可以通過將分離細胞培養擴增后加入生長因子或向細胞內導入基因的方法來控制細胞分化方向，從而間接鑒定成體干細胞口腔醫學技術。國際干細胞治療學會也提出了間充質干細胞的鑒定標準：盡管間充質干細胞沒有特異性的表面標志物，但其可群體表達CD105、CD90、CD73，而群體不表達CD34、CD45、CD11b、CD14、CD19口腔修復工藝。但這種鑒定手段必然需要昂貴的費用綜合治療椅，牙片機，潔牙機。再者，間充質干細胞在培養過程中極為不穩定，以BMSC為例，BMSC已經被證明是最重要和應用最廣泛的間充質干細胞來源執業助理醫師，待遇優厚，底薪加提成。

但是，BMSC的獲取和培養過程中始終存在許多制約：①BMSC的培養過程中細胞的早期衰老問題始終無法克服，隨著傳代過程的進行，細胞容易逐漸失去干細胞的特性，表現為分化能力減弱按照科學發展理念與時俱進，適應時代需要，。②間充質干細胞在取材時所面臨的創傷比較大，這里仍以BMSC為例，BMSC在取材時要抽取患者或捐贈者的正常骨髓組織，這無疑給患者或捐贈者帶來極大的痛苦，往往令人難以接受建立信用評價和服務能力評審制度，有 利于加強對社會辦醫的管理，引導規范行醫，提高管理水平。總之，以BMSC為代表的間充質干細胞雖然具備多向分化的潛能，但其在細胞培養過程中缺乏特異性表面標志物、極易早期衰老、取材時對患者創傷性大等不足使其作為組織工程種子細胞受到不同程度的限制價格的制定首先要符合門診的定位和定位群體的口腔健康消費心理。

針對這些限制，有研究證實，牙齦中的成纖維細胞具有類似干細胞的特性，在特定的誘導條件下能夠分化形成多種類型細胞，具有多向分化的潛能先進的消毒設施和嚴格的無菌操作，提供了優質醫療、優質服務的保證。因此，牙齦細胞能夠克服間充質干細胞的不足，在應用于組織工程時體現出一定的優勢七一：一醫、一助、一機、一針、一管、一消毒、一無菌包.。

3.牙齦在取材、細胞培養和細胞鑒定中的特點及優勢

牙齦組織屬于口腔黏膜中的咀嚼黏膜，組織學中將其分為上皮層和固有層，由于牙齦組織參與口腔的咀嚼運動功能，因此固有層直接附著在牙槽骨上，無黏膜下層秉承“多聽患者講一點，多為患者想一點”的服務理念。對于正常牙齦組織的取材往往來源于口腔中行阻生齒的拔除手術或者埋伏牙的拔除手術執行力是口腔診所核心競爭力形成的關鍵。因此口腔醫師獲取牙齦組織十分方便，更重要的是，由于口腔唾液中存在大量的透明質酸成分，從而使牙齦組織切除愈合后不留有瘢痕組織，不影響患者的美觀和口腔行使正常功能，這一點無疑從很大程度上克服了間充質干細胞特別是BMSC取材時破壞正常組織的缺陷，免除了取材時的痛苦，患者或捐贈者更容易接收管理是就要淘汰人渣、激活人員、培養人手、重用人才、與人物綁定。牙齦組織中的固有層，即結締組織，是牙齦最主要的組成部分，其中GFs作為牙齦結締組織固有層的主要細胞成分具備非常強的修復和再生能力口腔招聘網免費發布口腔招聘信息，。

對于GFs的培養和擴增，其過程簡單，往往采用原代培養的方法，繼而進行傳代擴增，由于GFs在一定意義上屬于成熟體細胞，雖然傳代次數有限，但是在有限的代次中其形態學、功能學和遺傳性質不會發生改變，能夠保持細胞的遺傳穩定性，經過傳代后的細胞仍然具備強大的修復和再生功能牙科醫生免費找工作，。從這個方面來說，克服了間充質干細胞應用于組織工程時早期階段就發生衰老的缺點口腔修復醫生，口腔種植醫生，。另外，研究表明，GFs的鑒定具有其特異的表面標志物，如波形蛋白（vimentin），Ⅲ型膠原蛋白等，比間充質干細胞鑒定必須群體表達CD105、CD90、CD73，而群體不表達CD34、CD45、CD11b、CD14、CD19的方法更為簡單和經濟口腔種植，口腔正畸醫生。從這個方面來說，解決了間充質干細胞應用于組織工程時缺乏特異性表面標志物的缺陷熟悉掌握方絲工矯正技術，。

4.GFs作為種子細胞在構建組織工程化組織器官中的應用

眾多學者經過大量研究，發現干細胞成分廣泛存在于牙源性組織中，其中最為常見的幾種有牙周膜來源的干細胞、牙髓來源的干細胞、脫落乳牙來源的干細胞以及牙囊來源的干細胞等熟練掌握口腔內科治療，。以上幾種干細胞均屬于牙源性的間充質干細胞，特別牙周膜來源的干細胞近年來已成為研究的焦點，但是無論哪一種牙源性的干細胞都存在上述間充質干細胞應用的限制問題，如取材問題，無論是健康的牙周膜、健康的牙髓組織還是健康的牙囊組織，其獲取過程都十分不易，健康的牙周膜往往來源于正畸拔除健康牙后周圍正常的牙周組織或者實驗動物的健康牙周膜，健康的牙髓來源于正畸拔除的健康牙體組織中的牙髓成分或者實驗動物的健康牙髓成分，健康的牙囊取材更為困難，牙囊只存在于牙體組織的發育過程中，一般情況下不能獲取，只能取自智齒的牙囊組織或實驗動物的健康牙囊中華人民共和國執業醫師法。

然而，研究者發現牙齦的結締組織和牙周膜組織主要是由成纖維細胞組成，并且已經證實了牙周膜成纖維細胞中存在成骨和成牙骨質細胞表型，可以向成骨細胞和成牙骨質細胞方向分化，以達到修復和再生牙槽骨和牙骨質的目的口腔臨床執業醫師。牙齦組織作為牙周組織中最重要的組成部分，其來源的GFs與牙周膜組織來源的成纖維細胞相比具有更強的增殖能力口腔醫學技術。研究表明，由于GFs中存在具有成骨細胞表型和成軟骨細胞表型的干細胞，因此研究者可以誘導GFs分化形成骨組織或軟骨組織，從而證實GFs具有自發的生成骨或軟骨組織的能力口腔修復工藝。另外，已被證實GFs能夠作為具有高增殖能力的誘導多能干細胞來源綜合治療椅，牙片機，潔牙機。這說明GFs可能具有多向分化的潛能，有類似于干細胞的特性執業助理醫師，待遇優厚，底薪加提成。

盡管有學者證實與BMSC相比，牙齦組織中的間充質干細胞更易被純化和分離出來，并且牙齦來源的間充質干細胞能在相當長的一段時間內保持干細胞的特性，具備向軟骨組織、脂肪組織和骨組織等方向分化的能力，但是直接從牙齦組織中分離出來的間充質干細胞的數量仍然十分有限，僅占GFs總數中的3%左右，其鑒定和純化細胞的特異性方法和技術同其他間充質細胞一樣并不完善，這充分說明獲得牙齦來源的間充質干細胞存在一定困難按照科學發展理念與時俱進，適應時代需要，。Liu等將人來源的GFs作為種子細胞進行原代培養及擴增，而后進行特定條件下誘導培養，誘導后細胞向血管內皮樣細胞方向分化建立信用評價和服務能力評審制度，有 利于加強對社會辦醫的管理，引導規范行醫，提高管理水平。

在該研究中誘導后細胞的形態學結構從最初的叢狀分布逐漸向鵝卵石或鋪路石樣形態分化；免疫細胞化學顯示CD31、CD34、血管性假性血友病因子和血管內皮細胞鈣黏素在誘導后的細胞質中呈陽性表達；透射電子顯微鏡顯示誘導后細胞的超微結構，細胞表面出現微絨毛樣結構，而在誘導后的細胞質中除含有粗面內質網、溶酶體等細胞器外還可觀察到Weible-Palade（W-P）小體樣結構；成管能力測試實驗結果顯示，誘導后形成的血管內皮樣細胞能夠形成類似于血管腔樣結構價格的制定首先要符合門診的定位和定位群體的口腔健康消費心理。這些結果充分說明人來源的GFs能夠誘導分化形成血管內皮樣細胞，具備一定的分化潛能先進的消毒設施和嚴格的無菌操作，提供了優質醫療、優質服務的保證。

Liu等在以上實驗研究基礎上進一步證實，GFs在血小板衍生因子和轉化生長因子β1兩種細胞因子聯合誘導條件下能夠分化形成血管平滑肌樣細胞七一：一醫、一助、一機、一針、一管、一消毒、一無菌包.。在該研究中誘導后細胞的形態學結構從叢狀分布逐漸向“峰谷”狀結構生長；免疫細胞化學顯示：α平滑肌肌動蛋白、平滑肌肌球蛋白重鏈、堿性調寧蛋白在誘導后的細胞質中呈陽性表達；透射電鏡結果顯示，誘導后細胞中只含有少量典型的細胞器，而在細胞質中可見大量粗細不一和平行排列的肌絲樣結構并形成肌絲束，以及電子密度較高的密體樣結構秉承“多聽患者講一點，多為患者想一點”的服務理念。這些結果均提示GFs能夠在體外誘導分化形成血管平滑肌樣細胞執行力是口腔診所核心競爭力形成的關鍵。以上研究表明，盡管GFs不是干細胞，但是卻具有一定的類似于干細胞的特性，具備多向分化的潛能管理是就要淘汰人渣、激活人員、培養人手、重用人才、與人物綁定。

5.小結

GFs作為一種修復和再生能力極強的牙齦結締組織來源的細胞，逐漸被應用于組織工程的研究中，雖然GFs并不是從牙齦組織中直接分離出來的間充質干細胞，但越來越多的研究證實了其具有多向分化的潛能，能夠在不同細胞因子誘導作用下分化形成軟骨細胞、骨細胞、內皮樣細胞以及平滑肌樣細胞，從一定程度上克服了間充質干細胞取材困難、含量少、缺乏特異性鑒定方法和容易早期衰老等缺點，為組織工程種子細胞的研究提供了新的途徑和思路口腔招聘網免費發布口腔招聘信息，。然而，盡管GFs已被證實具有多向分化的潛能和具有類似于干細胞的特性，但目前的許多研究僅僅局限于形態學和免疫學的范疇，對于其多向分化的原理和機制尚不清楚，有待研究者們進一步探索牙科醫生免費找工作，。